97国产精华最好的产品久久久-亚洲精品中文字幕久久久久-久久久久久无码精品人妻a片软件-亚洲色www成人永久网址-精品精品国产理论在线观看

15522676233
TECHNICAL ARTICLES

技術文章

當前位置:首頁技術文章蛋白質提純的注意事項和常見問題有什么?

蛋白質提純的注意事項和常見問題有什么?

更新時間:2023-09-22點擊次數:1577

在進行任何一種蛋白質純化的時候,都要時刻注意維護它的穩定性,保護它的活性,那么你知道蛋白質提純的注意事項和常見問題有什么嗎?讓我們一起來看看吧!

一、注意事項:

1、操作盡可能置于冰上或者在冷庫內進行。

2、濃度不要太稀,蛋白濃度維持在μg/mL~mg/mL。

3、選擇合適的pH,除非是進行聚焦層析,所使用的緩沖溶液pH避免與pI相同,防止蛋白質的沉淀。

4、使用蛋白酶抑制劑,防止蛋白酶對目標蛋白的降解;在純化細胞中的蛋白質時,加入DNA酶,降解DNA,防止DNA對蛋白的污染。

5、避免樣品反復凍融和劇烈攪動,以防蛋白質的變性。

6、緩沖溶液成分盡量模擬細胞內環境。

7、在緩沖溶液中加入0.1~1mmol/LDTT(二硫蘇糖醇)(或β-巰基乙醇),防止蛋白質的氧化。

8、加1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑,防止重金屬對目標蛋白的破壞。

9、使用滅菌溶液,防止微生物生長。

二、常見問題:

1、通過 His 標簽純化的蛋白,雜帶比較多,如何改進?

(1)如果純化的是上清,蛋白酶會部分降解目的蛋白,可通過加多種蛋白酶抑制劑改進。

(2)可提高雜蛋白與鎳柱結合起始咪唑濃度,以降低雜蛋白與鎳柱的親和力。

(3)雜蛋白和目的蛋白結合,可通過超聲前加入去垢劑的方式消除(1%-2%Tritonx-100)。

2、鎳柱使用中出現棕色的原因

(1)柱子發生堵塞,可能是樣品中細胞碎片或其他雜顆粒所致,所以樣品一定要高速離心,并過0.22或者0.45的膜。

(2)上清純化時,蛋白發生變性,有絮狀物產生,趕緊加入 1-2mM DTT (上清樣品處理要在冰浴中進行),還不行加尿素變性,使其在變形環境下。

(3)樣品處理時的料液比不要太小,否則黏度大,或者導致蛋白析出或變性,料液比要在 1/10-1/15 之間較適宜。

3、純化過程中蛋白出現了渾濁應如何處理?

(1)出現渾濁,說明蛋白處在不穩定的環境中或者自身就不穩定,所以要檢查緩沖體系是否正確,環境是否低溫,或在緩沖液中加入還原劑 DTT。

(2)加入肌氨酸鈉,迅速使蛋白變性,消除渾濁現象。

更多有關蛋白質提純的注意事項和常見問題,請聯系北京百奧創新科技有限公司:


聯系方式

15522676233

(全國服務熱線)

北京市海淀區溫泉鎮創客小鎮社區配套商業樓

3007606172@qq.com

關注我們

Copyright © 2025北京百奧創新科技有限公司 All Rights Reserved   工信部備案號:京ICP備17019404號-2

技術支持:化工儀器網   管理登錄   sitemap.xml

關注

聯系
聯系
頂部
主站蜘蛛池模板: 337p日本欧洲亚洲大胆精筑| 亚洲中文字幕无码一去台湾| 国产精品_九九99久久精品 | aa片在线观看无码免费| 日本va在线视频播放| 日韩高清亚洲日韩精品一区二区 | 熟女视频一区二区在线观看| 国产成人精品123区免费视频| 精品国产欧美一区二区| 国产精品igao视频网网址| 国产精品h片在线播放| 欧美成人va免费看视频| 久久青草精品欧美日韩精品 | 成年女人黄小视频| 国产卡1卡2卡3麻豆精品免费 | 无码人妻精一区二区三区| 久久久久亚洲精品天堂| 真人抽搐一进一出gif| 99久久人妻无码精品系列| 日日碰狠狠躁久久躁婷婷| 一二三四日本中文在线| 东京热毛片无码dvd一二三区| 少妇被又大又粗又爽毛片久久黑人 | 无码国产精品一区二区免费vr| 国产精品爽爽va吃奶在线观看| 国产成人综合亚洲欧美日韩| 免费乱码人妻系列无码专区| 免费人妻无码不卡中文18禁| 亚洲国产成人精品综合av| 亚洲大乳高潮日本专区| 亚洲色中文字幕在线播放| 女m羞辱调教视频网站| 亚洲精品一区二区三区麻豆| 激情伊人五月天久久综合| 久久精品中文闷骚内射| 日本熟妇中文字幕三级| 天天拍夜夜添久久精品大| 六月丁香亚洲综合在线视频| 欧美三级真做在线观看| 少萝疯狂?喷水自慰| 97人人模人人爽人人少妇|