產(chǎn)品簡介：

細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷性細(xì)胞（CIK 細(xì)胞）是一個異質(zhì)細(xì)胞群，包含 CD3+CD56+NK 樣 T 細(xì)胞和CD3+CD8+細(xì)胞毒性殺傷作用 T 細(xì)胞，具有殺傷腫瘤具有 MHC 限制性和非 MHC 限制性的特點， CIK 細(xì)胞對各種腫瘤尤其是對低表達(dá) MHC Ⅰ Ⅱ分子更有效。 本試劑盒可以從單個核細(xì)胞（MNC）在體外高效擴增成 CIK 細(xì)胞，為免疫學(xué)研究提供了一個有力工具。

產(chǎn)品特點：

· 成份明確，無異源成份

· 無菌，無支原體，低內(nèi)毒素

· 同時適用于膠血與外周血

· 14天培養(yǎng)后，細(xì)胞活率在90%以上wan全無血清培養(yǎng)，使用更安全

· 殺傷活力強，主要成分為NK樣T細(xì)胞及細(xì)胞毒性T細(xì)胞

操作方法：

一、血漿的提取與保存

1.將取到的 50-60mL 外周血置于 50mL 離心管中，室溫下 650g，離心 15min；

2.取上層黃色血漿部分于新的 50mL 離心管中（下層為血液細(xì)胞成分，用于后續(xù)單個核細(xì)胞的提取）；

3.將血漿置于 56°C 水浴鍋中滅活 30min；

4.血漿滅活完畢后，可見血漿呈現(xiàn)渾濁狀，900g，離心 10min；

5.取上清，于 4°C 保存待用。

二、單個核細(xì)胞的提取

1.取血漿提取步驟的下層紅色細(xì)胞沉淀，加入生理鹽水或 PBS 至原體積；

2.取 2 支 50mL 離心管，分別加入 15mL 淋巴細(xì)胞分離液，并將 1 步驟中的稀釋血液分別緩緩鋪加到淋巴細(xì)胞分離液的上層；

3.室溫下，800g 離心 20min（升速 1-5，無閘減速）；

4.離心后，離心管中樣品由上到下分為 4 層：血漿層-白膜層-人淋巴細(xì)胞分離液層-紅細(xì)胞與粒細(xì)胞的沉淀。分別小心吸取白膜層及其以下約一半的液體于新的離心管中，并加入生理鹽水或PBS 至 40mL 體積，混勻，300g 離心 10min；

5.棄上清，沉淀再次用 40mL 的生理鹽水或 PBS 重懸，300g 離心 10min；

6.棄上清，沉淀用少許 CIK 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基重懸，合并，取部分細(xì)胞懸液計數(shù)，備用。

三、單個核細(xì)胞接種與補液

1.第0天，配制50mL CIK 細(xì)胞wan全培養(yǎng)基：CIK 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 45mL，10%已熱滅活的自體血漿（5mL），CIK-I 100μL，CIK-II 100μL 以及終濃度為 1000IU/mL 的 IL-2。將制備好的單個核細(xì)胞（MNC）按 1.5M cells/mL 的細(xì)胞密度接種于 50mL 已配制好的 CIK 細(xì)胞wan全培養(yǎng)基中，混合均勻后轉(zhuǎn)移至 T75 瓶中，而后將 T75 瓶轉(zhuǎn)移至 5%二氧化碳培養(yǎng)箱 37°C 培養(yǎng)；

2.第 3 天（3×24h），補加 CIK 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 95mL，5%已熱滅活的自體血漿（5mL）以及 IL-2（IL-2 終濃度為 1000IU/mL），轉(zhuǎn)入細(xì)胞培養(yǎng)袋，此時培養(yǎng)袋含 150mL 培養(yǎng)基；

3.第 5 天，補加 CIK 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 150mL，1%已熱滅活的自體血漿 1.5mL 以及 IL-2（IL-2終濃度為 1000IU/mL），此時袋子含 300mL 培養(yǎng)液；

4.第 7 天，補加 CIK 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 300mL，剩余的所有自體熱滅活血漿以及 IL-2（IL-2 終濃度為 1000IU/mL），然后分成兩袋，此時每個袋子約含 300mL 培養(yǎng)液；

5.第 9 天，分別往每個培養(yǎng)袋補加 CIK 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 300mL 以及 IL-2（IL-2 終濃度為1000IU/mL），此時每個袋子約含 600mL 培養(yǎng)液；

6.第 11 天，分別往每個培養(yǎng)袋補加剩余 CIK 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基以及 IL-2（IL-2 終濃度為1000IU/mL），此時每個袋子約含 1000mL 培養(yǎng)液；

7.第 13-14 天，收獲 CIK 細(xì)胞。

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